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細胞因子的應(yīng)用及培養(yǎng)、凍存和復(fù)蘇

更新時間:2023-04-19      點擊次數(shù):1015
  大多數(shù)細胞因子是免疫應(yīng)答的產(chǎn)物,在動物和人體內(nèi)可發(fā)揮免疫學效應(yīng),終會通過上調(diào)免疫細胞對抗原物質(zhì)的免疫應(yīng)答,介導(dǎo)炎癥反應(yīng)而清除抗原物質(zhì)。
 
  抗原刺激和病原微生物感染均可誘導(dǎo)體內(nèi)產(chǎn)生細胞因子,因此細胞因子與疾病的發(fā)生、發(fā)展有著密切的關(guān)系,它們可參與疾病的發(fā)生、發(fā)展。
 
  另一方面,細胞株的培養(yǎng)、凍存和復(fù)蘇分為以下三點:
 
  細胞株的培養(yǎng)、凍存和復(fù)蘇
 
  1)細胞株的培養(yǎng)和傳代 培養(yǎng): 用于檢測細胞因子的細胞株通常培養(yǎng)于含10%小牛血清和抗生素的培養(yǎng)液中,培養(yǎng)細胞因子依賴細胞株還有加入適量細胞因子。
 
  在37℃ 5% CO2的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng),3~4天傳代一次。
 
  ★ 懸浮生長細胞的傳代: 直接直接吸去或離心后吸去培養(yǎng)上清液,用新鮮培養(yǎng)液懸浮細胞,1:3或1:5稀釋細胞后,分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
 
  ★ 帖壁生長細胞的傳代: 吸去培養(yǎng)液,用PBS洗滌細胞一次,加入消化液,在37℃中消化約3~10分鐘,待細胞開始脫落時,倒去消化液,加入新鮮培養(yǎng)液,懸浮和吹打分散細胞。也可以待細胞全部消化脫落,500×g離心5分鐘,去除消化液,用新鮮培養(yǎng)液懸浮細胞。1:3或1:5稀釋細胞后,分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
 
  2)細胞株的凍存: 1. 取培養(yǎng)2~3天生長旺盛的細胞,用細胞培養(yǎng)液將細胞配成2×106~2×107/ml。 在1ml細胞凍存管中加入0.5ml細胞懸液,0.4ml小牛血清和0.1ml二甲基亞砜(或甘油),混勻后密封。置4℃ 1小時,-20℃ 2小時,然后直接放入液氮中或置液氮蒸汽上過夜后浸入液氮中。
 
  3)細胞株的復(fù)蘇: 復(fù)蘇時,從液氮中取出凍存管,立即置37℃水浴中融化細胞。將細胞直接加入10ml含15%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液中,置37℃ 5%CO2飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。懸浮細胞待細胞全部沉降后小心吸去上清液,更換新鮮的上述培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng);帖壁細胞則培養(yǎng)2~3小時,待細胞帖壁后,倒去培養(yǎng)液,更換新鮮的上述培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)。也可以在加入新鮮培養(yǎng)液以后,500×g離心5分鐘,去上清液,加入新鮮培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)。
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